人血浆中***丙烯顺式和反式异构体检测

***丙烯为第二代***菌素类***，具有广谱***作用。临床用于***敏感菌所致的轻、中度***。***丙烯中顺式异构体的含量在90%以上，而反式异构体只占10%以下。顺反式异构体在化学稳定性和抗革兰阳性链球菌和***活性方面是相同的，但在抗革兰阴性大肠埃希***、***克雷伯菌等方面，顺式的***活性是反式的6～8倍。

可采用***液相色谱同时测定人血浆中顺式（Z）和反式（E）异构体浓度。

       检测所需仪器

***液相色谱仪，配有 工作站； 旋涡混合器； 高速台式离心机。

色谱条件

色谱柱：（200×4.6 mm，5μm）；流动相：0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液（磷酸调pH值2.50）-***（88：12）；检测波长：280nm；柱温：30 ℃；流速：1.2 ml/min；进样量：50μl。

       测定方法

1 精密量取血浆样品500μl，加入内标（100.2μg/ml***拉定）50μl，20%三氯醋酸100μl，漩涡混合1分钟，离心6分钟，取上层液，依次加入***0.5ml和二氯***2ml，振荡6分钟，离心6分钟，取上层液离心6分钟，取50μl上清液进样分析。

2 精密量取空白血浆500μl，分别加入顺式（Z）和反式（E）异构体标准系列溶液各50μl，配制成血浆中顺式（Z）异构体浓度为0.1003，0.3008，1.0025，2.0050，4.0100，8.0200，16.0400μg/ml和反式（E）异构体浓度为20.0，40.1，100.2，200.4，400.8，1002.0，1603.2ng/ml的血浆样品，按“血浆样品处理”项下自“加入内标溶液”起同法试验，以待测物浓度为横坐标X，待测物与内标物的峰面积比值（AS/Ai）为纵坐标Y，用加权***小二乘法[2]（权重系数：1/X2）进行线性回归运算，求得的线性回归方程即为标准曲线方程。

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