紫外可见分光光度计定量、定性分析需注意的问题

使用紫外可见分光光度计进行定量和定性分析需注意以下一些问题：

吸光度读数范围：吸光度测量误差在透过率过大或过小时都会变大，为了满足定量分析的误差要求(<5%),在定量分析时要求吸光度应在一定的范围内,这个范围的具体值与仪器性能有关，主要是与紫外可见分光光度计检测系统噪声大小有关，但通常都在0.1-1.0范围内，如果仪器的档次更低，则范围更窄。根据朗伯比尔定律，影响吸光度大小的因素主要是样品摩尔吸光系数，浓度和比色皿光程。实验中吸光度过大的样品可通过稀释样品使吸光度到所需范围内。如果样品不能稀释，可以改用光程较小的比色皿减小吸光度。吸光度过小的样品可使用光程较大的比色皿以增大吸光度。

吸收波长的选择： 进行单波长测量时，需要考虑朗伯比尔定律对入射光单色性的要求和测定灵敏度的要求。没有干扰时，一般选择在吸收峰的***大吸收波长位置处，如果有干扰，选择在没有干扰且吸光度变化较平缓的位置。 进行多波长校正时，除尽量满足单波长测定的波长要求外，还要求多个组分间的吸收光谱间线性无关。

狭缝的选择：狭缝的大小会影响到仪器的信噪比和标准曲线的线性范围。狭缝过大，通常会使线性范围变小，特别是当不在***大吸收波长位置测定时更是如此。狭缝过小，信噪比变差，基线平直度和测量数据的重复性会变差。此外，还需要考虑样品吸收峰宽度的影响。通常单波长测定时，一般选择在***大吸收波长位置，线性范围容易满足，可选择较宽的狭缝（1-2nm）多波长测定时，很难同时在所有波长都满足线性范围要求，应选择较小的狭缝。

重复测定次数和波长扫描速度：对吸光度不是很大的样品，或者狭缝不是很小，这是检测器检测的光信号的强度是比较大的，重复性较好，可选择较少的重复次数。相反，如果样品吸光度很大，狭缝很小，选择较大的重复次数可获得更好的结果。

测定波长间隔：在扫描光谱时需要选择，可根据样品吸收峰的宽度进行选择，峰宽较大时，可选择较大的波长间隔。反之亦反。通常每个正常的吸收峰应该用不少于30个数据点表示出来。

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